弓形蟲(chóng)IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
中文名稱(chēng)：弓形蟲(chóng)IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規格】
48人份／盒、96人份／盒。
【預期用途】
定性檢測人血清或血漿樣本中的弓形蟲(chóng)IgM抗體。
用于弓形蟲(chóng)感染的輔助診斷。檢測不得用于無(wú)癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測結果單獨作為終止妊娠的依據。
弓形蟲(chóng)?。═oxoplasmosis）又稱(chēng)弓形體病，是由剛地弓形蟲(chóng)所引起的人畜共患病。本病流行于世界各地，弓形蟲(chóng)是一種原蟲(chóng)，幾乎所有的哺乳動(dòng)物都有弓形蟲(chóng)寄生，是人類(lèi)的傳染源，其中，貓和貓科動(dòng)物在傳染此病時(shí)最為重要，因為常有大量的傳染性卵囊隨貓的糞便排出，污染外界環(huán)境，如人手、食具、食物或水被卵囊污染，即可經(jīng)口感染；貓狗的唾液中可有弓形蟲(chóng)，與貓狗玩耍時(shí)，手、臉被舔也可被感染，其次是豬、牛、羊，它們的肌肉中也可有包囊，未煮食用也可經(jīng)口感染，不同國家和地區感染率差異性很大，平均在25～50%左右。國外報道人群自然感染率為50～80%[1]，國內為0.1～47.3%，平均為5.17%[2,3]。
文獻報道[4~6]，由于腫瘤放療、化療的開(kāi)展，致使患者免疫功能低下，而伴發(fā)弓形蟲(chóng)感染，甚至造成死亡。國外某些國家已將弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測作為腫瘤病人常規檢查[7]。孕婦感染弓形蟲(chóng)后，可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播給胎兒，損害胚胎發(fā)育，引起胎兒嚴重的神經(jīng)系統發(fā)育畸形和智力障礙，降低人口素質(zhì)，甚至引起死亡。近期國內研究表明，我國孕婦弓形蟲(chóng)感染較普遍，對下一代的健康帶來(lái)嚴重威脅[8~9]。
一般情況下，弓形蟲(chóng)感染后首先出現抗弓形蟲(chóng)IgM抗體上升，可在感染后6天左右被測知，然后逐漸上升并維持數周至數月，最后逐漸下降直至消失[10]，故測定弓形蟲(chóng)IgM抗體適用于早期診斷，而弓形蟲(chóng)IgG抗體的出現晚于IgM，感染后2～3個(gè)月才達峰值，維持時(shí)間也較長(cháng)，因此消失也較晚。IgG抗體陽(yáng)性說(shuō)明曾經(jīng)感染過(guò)弓形蟲(chóng)，一般多為慢性感染，但也可為急性感染。在第一次檢測IgG抗體后2～3周再用同樣的方法進(jìn)行檢測，如抗體的效價(jià)有4倍以上的增長(cháng)，則具有診斷價(jià)值。
間接ELISA或IFA檢測IgM抗體時(shí)，類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）和抗核抗體（ANA）的存在可引起假陽(yáng)性反應，而高滴度的IgG競爭作用又可導致假陰性。ELISA捕獲法檢測IgM在靈敏度與特異性方面克服上述缺陷而成為檢測IgM抗體的首選方法。
【檢驗原理】
酶聯(lián)免疫捕獲法原理：用抗人IgM-μ鏈單克隆抗體包被微孔板，加待檢者血清或血漿到板孔中，樣品中存在的IgM抗體特異性地與微孔板表面的抗人IgM-μ鏈抗體形成抗體－二抗復合物，加入酶標記弓形蟲(chóng)抗體及弓形蟲(chóng)抗原，形成（抗體－二抗－抗原－抗弓形蟲(chóng)酶標記物）免疫復合物，加入底物后在酶作用下產(chǎn)生顏色反應，通過(guò)酶標儀測定顯色反應的強弱即可定性檢測待測樣品中的弓形蟲(chóng)IgM抗體。
【主要組成成分】
1. 本試劑盒中包含的組分：
序號 組分名稱(chēng) 主要成分 使用方法 裝量
    96人份/盒 48人份/盒
1 預包被抗人IgM-μ鏈抗體的微孔板 微孔板中預包被小鼠抗人IgM-μ鏈單克隆抗體。 直接使用，可拆成單孔使用 96孔 48孔
2 弓形蟲(chóng)抗體酶標記物 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的抗弓形蟲(chóng)單抗；硼酸鹽緩沖液，含弓形蟲(chóng)抗原、防腐劑、蛋白穩定劑。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 弓形蟲(chóng)IgM抗體陽(yáng)性對照 弓形蟲(chóng)IgM抗體陽(yáng)性人血清或血漿；硼酸鹽緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 弓形蟲(chóng)IgM抗體陰性對照 弓形蟲(chóng)IgM抗體陰性人血清或血漿；硼酸鹽緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
5 弓形蟲(chóng)IgM抗體臨界對照 弓形蟲(chóng)IgM抗體陽(yáng)性人血清或血漿；硼酸鹽緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
6 顯色液A 檸檬酸、過(guò)氧化氫。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 顯色液B 檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 濃縮洗滌液
（10倍） 磷酸鹽緩沖液，含0.5%吐溫-20，10倍濃縮。 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 樣品稀釋液（IgM） 硼酸鹽緩沖液，含甘油。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
10 終止液 0.5 mol/L 硫酸溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋   1個(gè) 1個(gè)
12 封板膜   1片 4片
13 記錄紙   1份 1份
注：酶標記物、臨界對照、陽(yáng)性對照、陰性對照，必須使用試劑盒配備的，不能使用其它批號產(chǎn)品。樣品稀釋液（IgM）可用于本公司IgM抗體檢測系列的ELISA試劑盒。顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液為通用試劑，可以用于本公司所有ELISA試劑盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸餾水或去離子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器與一次性吸嘴
37℃恒溫設備
微孔振蕩器
酶標儀
60分鐘或更長(cháng)時(shí)程的計時(shí)器
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內2～8℃保存。液體組分應擰緊瓶蓋2～8℃保存。各組分拆封后應在一個(gè)月內用完。
生產(chǎn)日期及失效日期見(jiàn)標簽。
【適用儀器】
具有450nm和630nm波長(cháng)的酶標儀
【樣本要求】
應按照臨床采血技術(shù)規范操作采集血清或血漿樣品。室溫保存樣品不要超過(guò)8小時(shí)；若實(shí)驗在8小時(shí)以后進(jìn)行，需將樣品保存在2℃～8℃；如保存超過(guò)1周則保存在-20℃以下，并避免反復凍融。本試驗可用于含乙二胺四乙酸（EDTA）、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽抗凝劑樣本的檢測，但含其它種類(lèi)抗凝劑的樣本能否用于本試驗尚無(wú)實(shí)驗數據。盡管膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯對本試劑盒檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾，仍應避免使用黃疸、溶血或高血脂樣品。明顯被污染的樣品不能用于檢測。
【檢驗方法】
1. 試驗過(guò)程注意事項
1.1 試劑盒各組分從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應在室溫平衡至無(wú)潮氣方可使用。拆封后未用完的包被板應放入密封袋內保存。
1.2 在儲存及孵育過(guò)程中，應避免強光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3 為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應使用一次性吸嘴，不要重復使用。
1.4 在取用對照品和酶標記物之前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過(guò)的樣品。
1.5 嚴格遵守規定的孵育時(shí)間和溫度。如果第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔太長(cháng)，將會(huì )導致不同的“預孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。
1.6 洗滌結束時(shí)，應將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內均無(wú)洗滌緩沖液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機，應注意正確操作。
2. 試驗準備
2.1 試劑盒反應試劑準備
2.1.1 微孔條
將檢測所需數量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2 洗滌液
在干凈的量筒內稀釋濃縮洗滌液。50mL濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500mL，混勻。
2.1.3 其它液體組分
直接使用，使用前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2 樣品準備
樣品1:100稀釋?zhuān)喝?0μL待檢樣品，加入至含有1mL樣品稀釋液（IgM）的小試管內，充分混勻。
3. 檢測過(guò)程
3.1 每次實(shí)驗每板須設空白孔、陽(yáng)性對照、陰性對照各1孔，臨界對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜擞浳?，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照直接使用，100μL/孔。其余每孔加入稀釋后樣品100μL。置37℃孵育60分鐘。
3.2 甩凈孔中液體，將洗液注滿(mǎn)每孔（約300μL/孔）后，停留1分鐘后甩凈拍干，反復3次。除空白孔外每孔加酶標記物50μL，置37℃孵育60分鐘。
3.3 甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50μL，置37℃避光10～15分鐘，每孔加入終止液50μL，輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4 以空白孔調零，用酶標儀讀取450nm處的A值?；蛞噪p波長(cháng)（A450nm－A630nm）計算A值。
4. 質(zhì)量控制
陽(yáng)性對照A值≥0.30，陰性對照A值≤0.15，臨界對照A值平均值≥0.15，證明實(shí)驗成立；否則試驗結果無(wú)效，需重新試驗。
【陽(yáng)性判斷值】
樣品A值＜臨界對照值均值為陰性，樣品A值≥臨界對照值均值為陽(yáng)性。
【檢驗結果的解釋】
1. 結果為陽(yáng)性提示弓形蟲(chóng)急性或近期感染，對陽(yáng)性結果建議1～2周后再次采樣檢測，動(dòng)態(tài)觀(guān)察抗體水平的變化。
2. 檢測結果僅供臨床參考，臨床醫生應結合病史、癥狀及其它檢測結果做出診斷。
【檢驗方法的局限性】
1. 樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染可能導致錯誤結果。
2. 實(shí)驗結果表明本品與交叉反應項目中所列干擾因子血清無(wú)交叉反應，但與其它干擾因子的交叉反應尚無(wú)實(shí)驗數據。
【產(chǎn)品性能指標】
1. 靈敏度、特異性
通過(guò)1122例臨床研究，本品與通過(guò)CE認證的同類(lèi)進(jìn)口試劑比較，靈敏度為96.4%，特異度為99.7%。
2. 重復性
用精密性參考品測定，CV（%）不高于15%（n＝10）。
3. 交叉反應
與類(lèi)風(fēng)濕因子及以下病原體的IgM抗體陽(yáng)性血清無(wú)交叉反應：血吸蟲(chóng)、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、單純皰疹Ⅰ型病毒、單純皰疹Ⅱ型病毒、巨細胞病毒。
4. 干擾試驗
4.1 與樣品接觸的抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
4.2 內源性物質(zhì)膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
4.3 纖維蛋白原對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾，因此本品可檢測人血清或血漿樣品。
【注意事項】
1. 本品僅用于體外診斷，一次性使用。
2. 用于制備本試劑盒陰性對照、陽(yáng)性對照、臨界對照的血清或血漿已經(jīng)乙肝表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）抗體、梅毒螺旋體抗體和人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）抗體檢測為陰性，試劑盒內其它各種組分均無(wú)生物傳染性。由于不能保證檢測各組分所有的傳染性因素，因此本試劑盒應作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應按實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作。
3. 任何臨床樣品都應作為具有傳染性樣品對待。
4. 待檢樣品及其他潛在感染材料試驗后應予以消毒。
5. 注意避免皮膚或黏膜直接接觸試劑或樣品。顯色液中含TMB，終止液含硫酸。含TMB的試劑在試驗中會(huì )誘發(fā)其它反應；含硫酸的試劑有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應立即用水徹底清洗。
【標識的解釋】
包裝標簽
的標識    
標識的含義 溫度限制 體外診斷醫療器械 參考使用說(shuō)明 不得二次使用
【參考文獻】
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【基本信息】
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
住所：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     
聯(lián)系方式：電話(huà)號碼：0756-3890858
傳真號碼：0756-3890848
售后服務(wù)單位名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
聯(lián)系方式：電話(huà)號碼：0756-3890858
生產(chǎn)地址：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     
生產(chǎn)許可證編號：粵食藥監械生產(chǎn)許20040941號
【醫療器械注冊證書(shū)編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】國械注準20163402554
【說(shuō)明書(shū)核準及修改日期】2016年12月29日