弓形蟲(chóng)抗體（IgG）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：弓形蟲(chóng)抗體（IgG）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規格】
96人份／盒，48人份／盒
【預期用途】
本試劑盒用于體外定性檢測人血清或血漿樣品中的弓形蟲(chóng)IgG抗體。
本品系用弓形蟲(chóng)抗原包被的微孔板和抗人IgG抗體酶標記物及其他試劑配套組成，適用于弓形蟲(chóng)病的輔助診斷。
弓形蟲(chóng)?。═oxoplasmosis）又稱(chēng)弓形體病，是由剛地弓形蟲(chóng)所引起的人畜共患病。本病流行于世界各地，弓形蟲(chóng)是一種原蟲(chóng)，幾乎所有的哺乳動(dòng)物都有弓形蟲(chóng)寄生，是人類(lèi)的傳染源，其中，貓和貓科動(dòng)物在傳染此病時(shí)最為重要，因為常有大量的傳染性卵囊隨貓的糞便排出，污染外界環(huán)境，如人手、食具、食物或水被卵囊污染，即可經(jīng)口感染；貓狗的唾液中可有弓形蟲(chóng)，與貓狗玩耍時(shí)，手、臉被舔也可被感染，其次是豬、牛、羊，它們的肌肉中也可有包囊，未煮食用也可經(jīng)口感染，不同國家和地區感染率差異性很大，平均在25～50%左右。國外報道人群自然感染率為50～80%[1]，國內為0.1~47.3%，平均為5.17%[2,3]。
文獻報道[4~6]，由于腫瘤放療、化療的開(kāi)展，致使患者免疫功能低下，而伴發(fā)弓形蟲(chóng)感染，甚至造成死亡。國外某些國家已將弓形蟲(chóng)血清學(xué)檢測作為腫瘤病人常規檢查[7]。孕婦感染弓形蟲(chóng)后，可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播給胎兒，損害胚胎發(fā)育，引起胎兒嚴重的神經(jīng)系統發(fā)育畸形和智力障礙，降低人口素質(zhì)，甚至引起死亡。近期國內研究表明，我國孕婦弓形蟲(chóng)感染較普遍，對下一代的健康帶來(lái)嚴重威脅[8~9]。
一般情況下，弓形蟲(chóng)感染后首先出現抗弓形蟲(chóng)IgM抗體上升，可在感染后6天左右被測知，然后逐漸上升并維持數周至數月，最后逐漸下降直至消失[10]，故測定弓形蟲(chóng)IgM抗體適用于早期診斷，而弓形蟲(chóng)IgG抗體的出現晚于IgM，感染后2～3個(gè)月才達峰值，維持時(shí)間也較長(cháng)，因此消失也較晚。IgG抗體陽(yáng)性說(shuō)明曾經(jīng)感染過(guò)弓形蟲(chóng)，一般多為慢性感染，但也可為急性感染。在第一次檢測IgG抗體后2～3周再用同樣的方法進(jìn)行檢測，如抗體的效價(jià)有4倍以上的增長(cháng)，則具有診斷價(jià)值。
【檢驗原理】
樣品中待測抗體與微孔板表面的弓形蟲(chóng)抗原形成抗原抗體復合物，加入抗人IgG抗體酶標記物，形成（抗原－待測抗體－抗人IgG抗體酶標記物）免疫復合物，加入顯色液，在酶作用下產(chǎn)生顏色反應，通過(guò)酶標儀測定顯色反應即可定性檢測待測樣品中的弓形蟲(chóng)IgG抗體。
【主要組成成分】
1.本試劑盒包含的組份：
序號 組份名稱(chēng) 主要成分 使用方法 裝量
    96人份/盒 48人份/盒
1 預包被弓形蟲(chóng)抗原的微孔板 微孔板中預包被弓形蟲(chóng)天然抗原 可拆成單孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgG抗體酶標記物 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的抗人IgG抗體（來(lái)源于山羊）；硼酸鹽緩沖液，含防腐劑、穩定劑。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 弓形蟲(chóng)IgG抗體陽(yáng)性對照 弓形蟲(chóng)IgG抗體陽(yáng)性人血清或血漿；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 弓形蟲(chóng)IgG抗體陰性對照 弓形蟲(chóng)IgG抗體陰性人血清或血漿；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
5 弓形蟲(chóng)IgG抗體臨界對照 弓形蟲(chóng)IgG抗體陽(yáng)性人血清或血漿；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
6 顯色液A 含檸檬酸、過(guò)氧化氫 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 顯色液B 含檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 濃縮洗滌液 磷酸鹽緩沖液，含0.5%Tween-20，10倍濃縮。 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 樣品稀釋液
（IgG） 硼酸緩沖液。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
10 終止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋   1個(gè) 1個(gè)
12 封板膜   4片 4片
13 記錄紙   1份 1份
注：酶標記物、陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照，必須使用試劑盒配備的，不能使用其它批號產(chǎn)品。顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液為通用試劑，可用于本公司所有ELISA試劑盒。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。生產(chǎn)日期及失效日期見(jiàn)標簽。。
拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內2℃～8℃保存。各組份拆封后應在一個(gè)月內用完。
【樣本要求】
本試驗用血清或血漿進(jìn)行檢測，用量為10μL。血清或血漿勿使用染菌、脂血或溶血樣品。按照標準方法收集血清，室溫保存樣品不要超過(guò)8小時(shí)；若實(shí)驗在8小時(shí)以后進(jìn)行，需將樣品保存在2℃～8℃；如保存超過(guò)1周則保存在-20℃以下，并盡量避免反復凍融，凍融次數不宜超過(guò)5次。本試驗可用于含檸檬酸鈉、EDTA-K2、草酸鈉和肝素鈉抗凝劑樣本的檢測，但含其它種類(lèi)抗凝劑的樣本能否用于本試驗尚無(wú)實(shí)驗數據。
【檢驗方法】
1.  試驗過(guò)程注意事項
1.1 試劑盒各組份從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應在室溫(20℃～25℃)平衡至無(wú)潮氣方可使用。拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內保存。
1.2  在儲存及溫育過(guò)程中，應避免強光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3  為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應使用一次性吸嘴，不要重復使用。
1.4  在取用對照品和酶標記物之前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過(guò)的樣品。
1.5  嚴格遵守規定的溫育時(shí)間和溫度。如果第一孔與最后一孔加樣時(shí)間間隔太長(cháng)，將會(huì )導致不同的“預溫育”時(shí)間，從而影響測量值的準確性及重復性。
1.6  洗滌結束時(shí)，應將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，確保所有孔內均無(wú)殘留洗滌液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機，應注意正確操作。
2.  試驗準備
2.1  試劑盒反應試劑準備
2.1.1  微孔條
將檢測所需數量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2  洗滌液
在干凈的量筒內稀釋濃縮洗滌液。50mL濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500mL，混勻。
2.1.3  其它液體組份
直接使用，使用前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2  樣品準備
樣品1:100稀釋?zhuān)喝?0L待檢樣品，加入至含有1mL樣品稀釋液（IgG）的小試管內，充分混勻。
3.  檢測過(guò)程
3.1  每次實(shí)驗每板須設空白孔（若以雙波長(cháng)檢測不設空白孔）、陽(yáng)性對照、陰性對照各1孔，臨界對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜擞浳?，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照直接使用，100L/孔。其余每孔加入稀釋后樣品100L。置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.2  甩凈孔中液體，將洗液注滿(mǎn)每孔（約300L /孔）后，甩凈拍干，反復3次。除空白孔外每孔加酶標記物50L（1滴），置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.3  甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50L（1滴），置37℃±1℃避光15分鐘，每孔加入終止液50L（1滴），輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4  單波長(cháng)檢測：以空白孔調零，用酶標儀讀取450nm處的A值；雙波長(cháng)檢測：用酶標儀讀取450nm和630nm處的A值，以A450nm－A630nm計算A值。
4.  質(zhì)量控制
陽(yáng)性對照A值平均值≥0.50，陰性對照A值平均值≤0.10，臨界對照A值平均值介于0.12～0.35，證明實(shí)驗成立；否則試驗結果無(wú)效，需重新試驗。
5.  結果判定
樣品A值≥臨界對照A值平均值判為陽(yáng)性
樣品A值＜臨界對照A值平均值判為陰性
【檢驗結果的解釋】
本品可定性檢測弓形蟲(chóng)IgG抗體，本實(shí)驗陽(yáng)性提示弓形蟲(chóng)既往感染，結果僅供臨床參考。對陽(yáng)性和可疑結果建議1～2周后再次采樣檢測，動(dòng)態(tài)觀(guān)察抗體水平變化，并結合臨床綜合做出判斷。
【檢驗方法的局限性】
1.  樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染、高溫失活都可能導致錯誤結果。
2.  不能僅依據單次的實(shí)驗結果做出診斷。精確的診斷應考慮臨床病史、癥狀及血清學(xué)實(shí)驗，并且血清學(xué)實(shí)驗結果對于免疫低下患者的診斷價(jià)值有限。
【產(chǎn)品性能指標】
1.  外觀(guān)
標簽應清晰，易識別。試劑盒各組份應齊全，完整，液體無(wú)滲漏。
2.  陰性參考品符合率
15份陰性企業(yè)參考品檢測結果不得出現假陽(yáng)性（15／15）。
3.  陽(yáng)性參考品符合率
15份陽(yáng)性企業(yè)參考品檢測結果不得出現假陰性（15／15）。
4.  檢測限
用檢測限參考品進(jìn)行檢定，不高于1.0IU/mL。
5.  重復性
用重復性參考品重復檢測10次，其變異系數（CV）不高于15％（n＝10）。
6.  穩定性
37℃放置6天，陰性參考品符合率、陽(yáng)性參考品符合率、檢測限及重復性等檢定指標達到2～5的要求。
7.  生物安全性
試劑盒中對照品要求HBsAg、HIV-Ab、HCV-Ab及梅毒螺旋體抗體檢測為陰性。
8.　對國家參考品檢測能力
本品檢測國家參考品（230023-200901），15份陰性參考品檢測結果全部為陰性；9份陽(yáng)性參考品檢測結果全部為陽(yáng)性；精密性≤15％（n=10）；最低檢出量不高于5IU/mL，均符合國家參考品標準規定。
【注意事項】
1.  本品僅用于體外診斷，不同批號試劑組份不得混用。
2.  嚴格按說(shuō)明書(shū)操作，操作前必須先將試劑盒平衡至室溫，操作時(shí)反應溫度和時(shí)間必須嚴格控制。
3.  拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內保存。
4.  凡是染菌、嚴重溶血、黃疸或高血脂的待檢血清可能引起錯誤結果，應重新采樣復試。
5.  本實(shí)驗陽(yáng)性提示弓形蟲(chóng)既往感染，臨床醫生應結合病史、體驗等全面考慮診斷；判斷臨床意義應動(dòng)態(tài)觀(guān)察，即對陽(yáng)性和可疑者要求1～2周后進(jìn)行復查，觀(guān)察抗體水平的變化。
6.  本試劑盒在制備過(guò)程中用作原料（陰性、陽(yáng)性、臨界）的血清或血漿已經(jīng)HBsAg、HCV抗體、梅毒螺旋體抗體和HIV抗體檢測無(wú)反應，弓形蟲(chóng)抗原經(jīng)超聲波完全破碎，無(wú)感染性，試劑盒內其它各種組分均無(wú)生物傳染性。由于不能保證檢測原料所有的傳染性因素，因此本試劑盒應作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應按良好的實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作。
7.  任何臨床樣本都應作為具有傳染性樣品對待。
8.  顯色液B中含TMB，在試驗中會(huì )誘發(fā)其它反應；終止液含硫酸，有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應立即用水徹底清洗。
【標識的解釋】
包裝標簽
的標識    
標識的含義 溫度限制 體外診斷醫療器械 參考使用說(shuō)明 不得二次使用
【參考文獻】
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【基本信息】
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
住所：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號    
聯(lián)系方式：
售后服務(wù)單位名稱(chēng)：
聯(lián)系方式：
生產(chǎn)地址：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     
生產(chǎn)許可證編號： 
【醫療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】
【說(shuō)明書(shū)核準及修改日期】