風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：風(fēng)疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規格】 
48人份／盒、96人份／盒。
【預期用途】
產(chǎn)品定性檢測人血清或血漿中的風(fēng)疹病毒IgM抗體。 
風(fēng)疹[1～3]屬于皰疹類(lèi)病毒中的披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬，是引起風(fēng)疹的病原體，為RNA病毒。風(fēng)疹病毒經(jīng)過(guò)呼吸道傳播，潛伏期約2～3周，病毒增殖后進(jìn)入血流引起病毒血癥。風(fēng)疹的臨床表現類(lèi)似麻疹，較麻疹感染癥狀輕，病程短，臨床癥狀不易與麻疹區分，需要血清學(xué)方法鑒定。60年代中期，風(fēng)疹疫苗的研制成功，使先天性風(fēng)疹感染成為可預防的疾病。風(fēng)疹病毒在人群中感染極為普遍，發(fā)達國家和地區由于對學(xué)齡前兒童、青少年和育齡婦女廣泛接種疫苗，使得風(fēng)疹的發(fā)病率很低[4，5]。而在我國不少地區仍有發(fā)生和流行[4、6～8]。妊娠期間，尤其是在妊娠早期感染了風(fēng)疹病毒，不論發(fā)生顯性或隱性感染均有可能導致胎兒患先天性風(fēng)疹綜合征(CRS)，即多臟器受到損害而導致先天性缺損。主要臨床表現為：新生兒先天性心臟病、白內障、先天性耳聾、智力低下、發(fā)育遲緩、小頭兒等。其損害的程度與孕婦感染的時(shí)間有關(guān)，妊娠期感染越早，畸形發(fā)生率越高，損害程度也越大。
風(fēng)疹病毒感染后特異性IgM抗體出現早，上升快、持續時(shí)間短，出現皮疹后的兩周后達到最高水平并持續1~2個(gè)月，因此，風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢出可用于原發(fā)性風(fēng)疹感染的診斷。
【檢驗原理】
酶聯(lián)免疫間接法原理：用風(fēng)疹病毒重組抗原包被微孔板，加待檢者血清或血漿到板孔中，樣品中的風(fēng)疹病毒IgM抗體特異性地與微孔板表面的風(fēng)疹病毒抗原結合，形成抗原抗體免疫復合物，洗板，除去多余物質(zhì)后，加入抗人IgM抗體酶標記物，形成（抗原－抗體－二抗酶標記物）免疫復合物。洗板，除去多余的結合物，加入顯色液，在酶作用下產(chǎn)生顏色反應，通過(guò)酶標儀測定顯色反應的強弱即可定性檢測待檢樣品中的風(fēng)疹病毒IgM抗體。樣品稀釋液中含有羊抗人IgG抗體，可與樣品中的人IgG抗體及類(lèi)風(fēng)濕因子結合，減少特異性IgG抗體及類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾。
【主要組成成份】
1. 本試劑盒中包含的組份：
序號 組份名稱(chēng) 主要成分 使用方法 裝量
    96人份／盒 48人份／盒
1 預包被風(fēng)疹病毒抗原的微孔板 微孔板中預包被風(fēng)疹病毒重組抗原。 可拆成單孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgM抗體酶標記物 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的小鼠抗人IgM單克隆抗體；硼酸鹽緩沖液，含防腐劑、穩定劑等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
3 風(fēng)疹病毒IgM抗體陽(yáng)性對照 風(fēng)疹病毒IgM陽(yáng)性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑等。 直接使用 1.0ml×1支 1.0ml×1支
4 風(fēng)疹病毒IgM抗體陰性對照 風(fēng)疹病毒IgM陰性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑等。 直接使用 1.0ml×1支 1.0ml×1支
5 風(fēng)疹病毒IgM抗體臨界對照 風(fēng)疹病毒IgM陽(yáng)性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、穩定劑等。 直接使用 1.8ml×1支 1.8ml×1支
6 顯色液A 檸檬酸、過(guò)氧化氫等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
7 顯色液B 檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
8 濃縮洗滌液 磷酸鹽緩沖液，含0.5%Tween-20，10倍濃縮。 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50ml×1瓶 50ml×1瓶
9 樣品稀釋液（IgM） 硼酸鹽緩沖液，含甘油、山羊抗人IgG等。 直接使用 50ml×2瓶 50ml×1瓶
10 終止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
11 密封袋   1個(gè) 1個(gè)
12 封板膜   4片 4片
13 記錄紙   1份 1份
注：酶標記物、臨界對照、陽(yáng)性對照、陰性對照，樣品稀釋液必須使用試劑盒配備的，不能使用其它批號產(chǎn)品。顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液為通用試劑，可以用于本公司所有ELISA試劑盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸餾水或去離子水
微孔板清洗器
10μl～100μl、1ml移液器與一次性吸嘴
37℃恒溫設備
微孔振蕩器
酶標儀
60分鐘或更長(cháng)時(shí)程的計時(shí)器
【儲存條件及有效期】
2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內2℃～8℃保存，液體組分應擰緊瓶蓋2℃～8℃保存。各組份拆封后應在一個(gè)月內用完。
生產(chǎn)日期及失效日期見(jiàn)標簽。
【適用儀器】
具有450nm和630nm波長(cháng)的酶標儀
【樣本要求】
應按照臨床采血技術(shù)規范操作采集血清或血漿樣品。室溫保存樣品不要超過(guò)8小時(shí)；若實(shí)驗在8小時(shí)以后進(jìn)行，需將樣品保存在2℃～8℃；如保存超過(guò)1周則保存在-20℃以下，并避免反復凍融。盡管膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯對本試劑盒檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾，仍應避免使用黃疸、溶血或高血脂樣品。明顯被污染的樣品不能用于檢測。
【檢驗方法】
1.  試驗過(guò)程注意事項
1.1  試劑盒各組份從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應在室溫（20℃～25℃）平衡至無(wú)潮氣方可使用。拆封后未用完的包被板應放入密封袋內保存。
1.2  在儲存及溫育過(guò)程中，應避免強光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3  為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應使用一次性吸嘴，不要重復使用。
1.4  在取用對照品和酶標記物之前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過(guò)的樣品。
1.5  嚴格遵守規定的溫育時(shí)間和溫度。如果第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔太長(cháng)，將會(huì )導致不同的“預溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。
1.6  洗滌結束時(shí)，應將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內均無(wú)洗滌緩沖液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機，應注意正確操作。
2.  試驗準備
2.1  試劑盒反應試劑準備
2.1.1  微孔條
將檢測所需數量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2  洗滌液
在干凈的量筒內稀釋濃縮洗滌液。50ml濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500ml，混勻。
2.1.3  其它液體組份
直接使用，使用前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2  樣品準備
樣品1:100稀釋?zhuān)喝?0l待檢樣品，加入至含有1ml樣品稀釋液（IgM）的小試管內，充分混勻。
3．  檢測過(guò)程
3.1  每次實(shí)驗每板須設空白孔（若以雙波長(cháng)檢測不設空白孔）、陽(yáng)性對照、陰性對照各1孔，臨界對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜擞浳?，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照直接使用，100l/孔。其余每孔加入稀釋后樣品100l。置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.2  甩凈孔中液體，將洗液注滿(mǎn)每孔（約300μl/孔）后，甩凈拍干，反復3次。除空白孔外每孔加酶標記物50μl，置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.3  甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50μl，置37℃±1℃避光15分鐘，每孔加入終止液50μl，輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4  單波長(cháng)檢測：以空白孔調零，用酶標儀讀取450nm處的A值；
雙波長(cháng)檢測：用酶標儀讀取450nm和630nm處的A值，以A450nm－A630nm計算A值。
4.  質(zhì)量控制
陰性對照A值≤0.15，0.20≤臨界對照A值平均值≤0.80，臨界對照A值平均值／陰性對照A值平均值≥2.0，陽(yáng)性對照A值＞臨界對照A值平均值，證明實(shí)驗成立，否則試驗結果無(wú)效，需重新試驗。
【陽(yáng)性判斷值】
計算S/CO值，S/CO=樣品A值／臨界對照A值平均值。
反應性（R）：S/CO≥1.1
可疑（S）：0.9＜S/CO＜1.1
陰性（N）：S/CO≤0.9
【檢驗結果的解釋】
1.  結果為反應性提示風(fēng)疹病毒新近感染，對反應性或可疑（0.9＜S/CO＜1.1）結果建議患者在1周內再次采樣檢測，同時(shí)進(jìn)行風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體檢測，動(dòng)態(tài)觀(guān)察抗體水平的變化；或采用其它方法確認結果。
2.  感染初期，IgM未產(chǎn)生或滴度很低會(huì )導致陰性結果，疑似者應在7～14天內復查，復查時(shí)同時(shí)平行檢測上次采集的標本以確認是否出現血清學(xué)陽(yáng)轉或滴度明顯升高。
3.  免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清抗體檢測的參考價(jià)值有限。
4.  IgM抗體陽(yáng)性不僅發(fā)生在原發(fā)感染，在繼發(fā)感染亦可見(jiàn)IgM反應。
5.  假陽(yáng)性和假陰性結果可能對臨床造成不良影響，假陰性可能導致患先天性風(fēng)疹綜合征胎兒出生的風(fēng)險，假陽(yáng)性可能導致懷孕期婦女或新生兒接受不必要的抗病毒治療等。
6.  檢測結果僅供臨床參考，臨床醫生應結合病史、癥狀及其它檢測結果做出診斷。
【檢驗方法的局限性】
樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染可能導致錯誤結果。
【產(chǎn)品性能指標】
1.  靈敏度、特異性
本品檢測1020例不同人群樣本，靈敏度為96.7%，特異度為97.1%。
2.  精密性
批內不精密度CV（%）不高于15%（n＝10）。
3.  交叉反應
與抗核抗體陽(yáng)性血清、RF陽(yáng)性血清及以下病原體的IgM抗體陽(yáng)性血清未發(fā)現交叉反應：麻疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒、弓形蟲(chóng)、EB病毒、科薩奇病毒、腮腺炎病毒、人乳頭狀瘤病毒。與其它病原體的交叉反應尚無(wú)實(shí)驗數據。
4.  干擾試驗
與樣品接觸的常規抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
一定濃度范圍的內源性物質(zhì)（膽紅素0.1~0.4 mg/ml、血紅蛋白5~50 mg/ml、甘油三酯2~8 mg/ml）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
【注意事項】
1.  本品僅用于體外診斷，一次性使用。
2.  用于制備本品陰性對照、陽(yáng)性對照、臨界對照的血清或血漿已經(jīng)HBsAg、HCV抗體、梅毒螺旋體抗體和HIV抗體檢測為陰性，試劑盒內其它各種組份均無(wú)生物傳染性。由于不能保證檢測各組份所有的傳染性因素，因此本品應作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應按實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作。
3.  任何臨床樣品都應作為具有傳染性樣品對待。
4.  待檢樣品及其他潛在感染材料試驗后應予以消毒。
5.  注意避免皮膚或黏膜直接接觸試劑或樣品。顯色液中含TMB，終止液含硫酸。含TMB的試劑在試驗中會(huì )誘發(fā)其它反應；含硫酸的試劑有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應立即用水徹底清洗。
【標識的解釋】
包裝標簽
的標識    
標識的含義 溫度限制 體外診斷醫療器械 參考使用說(shuō)明 不得二次使用
【參考文獻】
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【基本信息】
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
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生產(chǎn)地址：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     郵政編碼：519085
生產(chǎn)許可證編號：粵食藥監械生產(chǎn)許20040941號
【醫療器械注冊證書(shū)編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】國械注準20163402227
【說(shuō)明書(shū)核準及修改日期】2016年11月01日